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发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被

发布时间:2019-08-06 16:19 来源:未知 编辑:admin

  发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.实验原理:细菌代谢正常时,发

  发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.实验原理:细菌代谢正常时,发

  发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境影响到发光细菌代谢时,...

  发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境影响到发光细菌代谢时,发光会立即受到抑制,且抑制程度与影响物质浓度大小呈相关关系.实验材料:明亮发光杆菌(海水细菌)、待测海水水样、2%的NaCl溶液、3%NaCl溶液、生物毒性测试仪(用于测定细菌发光强度)、全温振荡器、试管等.Ⅰ.发光细菌的培养发光细菌可以直接从海水中和海鱼的体表和内脏中分离,所采用的培养基成分为:胰蛋白胨0.5%,酵母膏0.5%,甘油0.3%,KH2PO40.1%,Na2HPO40.5%,NaCI3%,琼脂2%,pH6.5.(1)发光细菌为______(自养型/异养型).取海鱼内脏放入灭菌培养皿中20℃培养12-18小时,在暗室中寻找发光点,用______刮取少许菌苔,在______培养基中采用______法获得纯化的发光菌株.使用前接种到______培养基中20℃下振荡培养10-12小时,增殖后用磷酸缓冲液稀释后备用.Ⅱ.海水中重金属污染程度测定a、配制发光菌悬液;b、抑光反应:按照下表配置海水样品稀释液;表1海水中重金属污染程度测定 试管编号 1 2 3 4 5 3%NaCl溶液(mL) 4.74 4.49 4.24 3.99 海水样品(mL) 0.25 0.50 0.75 1.00 发光菌悬液(mL) 0.01 0.01 0.01 0.01 混合液中海水浓度(%) 0.05 0.10 0.15 0.20(2)表1中1号试管的作用是______.(3)请在表格中填写适当的数据.(4)利用生物毒性测试仪测定各试管的______(测定指标).Ⅲ.五氯酚钠毒性测定资料:五氯酚钠在水中以五氯苯酚阴离子和五氯苯酚分子平衡存在;五氯苯酚比五氯酚钠的极性小得多,更容易通过生物膜而与细菌细胞相接触.实验温度25℃下,pH为6.0、7.0、8.0、9.0时,pH每升高1个单位,分子态五氯苯酚所占的比例就下降一个数量级.a、将五氯酚钠配成5个左右浓度等级,将接种后12h的菌液1-2mL用20-30mL3%NaCl溶液稀释混合,磁力搅拌10min 后,?取0.2mL加入比色管中,上下振荡5次,去塞,静置15min后用生物毒性测试仪测定发光强度.b、计算相对发光率相对发光率(RL)=测试管发光量mV/对照管发光量mV×100%计算对应相对发光率减小50%的物质浓度(EC50)??c.不同pH条件下,五氯酚钠毒性测定发光细菌适宜生存的pH值为6.0-9.0?表2 不同pΗ 值下五氯酚钠毒性测定结果/㎎?L-1 pΗ 6.0 7.0 8.0 9.0 EC50值 1.74 2.41 9.39 15.94(5)表2的结果与结论______.(6)据资料分析可能的原因:______.

  展开全部(1)发光细菌的代谢方式为异养型,接种时可用接种环接种到固体培养基上,通过平板划线法获得纯化的菌株;然后利用液体培养基进行扩大培养.

  (3)根据对照原则和等量原则,1号试管中应不加入海水样品,且保持试管中液体相等,故应加入4.99mL3%NaCl溶液及0.01mL发光菌悬液.

  (4)本实验测定指标可用利用发光率来表示,故可用生物毒性测试仪测定各试管的发光强度.

  (5)根据表2的结果可知发光细菌在 pH值6.0-9.0间,EC50值随着pΗ值的提高而增大,故说明五氯酚钠对发光细菌的毒性降低.

  (6)据资料分析可能的原因为五氯苯酚易通过细胞膜进入细菌,对细菌造成毒性.发光细菌在pH值6.0-9.0间,随着pH升高,分子态五氯苯酚所占的比例就下降,进入细菌细胞的数量减少,因而毒性下降.

  (5)发光细菌在 pH值6.0-9.0间,EC50值随着pΗ值的提高而增大,五氯酚钠对发光细菌的毒性降低.?

  (6)五氯苯酚易通过细胞膜进入细菌,对细菌造成毒性.发光细菌在 pH值6.0-9.0间,随着pH升高,分子态五氯苯酚所占的比例就下降,进入细菌细胞的数量减少,因而毒性下降.

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